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培養L929細胞要用到哪些試驗儀器及其詳細的操作步驟
點擊次數:143 發布時間:2020-08-24
       細胞培養是當前細胞生物學乃至整個生命科學研究與生物工程中基本的實驗技術。
  動物細胞培養為疫苗生產、藥物研製與腫瘤防治等醫學實踐提供了全新的手段。細胞培養包括原核生物細胞,入細菌;真核單細胞生物,入酵母菌、四膜蟲等;植物細胞與動物細胞的培養以及於此密切相關的病毒的培養。
  L929細胞的培養方法
  1.接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配製75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
  2.肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,並對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
  3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
  4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒)。
  5.1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37℃,5%CO2培養。
  L929細胞的具體操作
  (一)實驗前準備:1.將水浴鍋預熱至37℃2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超淨工作台台麵。3.在超淨工作台中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
  (二)取出凍存管:1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
  (三)迅速解凍:1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,並要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。2.約1-2min後凍存管內液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超淨台內。
  (四)平衡離心:用架盤天平平衡後,放入離心機中3000r/min離心3min。
  (五)製備細胞懸液:1.吸棄上清液。2.向離心管內加入10ml培養液,吹打製成細胞懸液。(六)細胞計數:細胞濃度以5×105/ml為宜。
  (七)培養細胞將複合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)後換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
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